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HSF细胞/ HSF人皮肤成纤维细胞 培养步骤

2019/10/19 16:09:09发布6次查看

hsf细胞/ hsf人皮肤成纤维细胞   培养步骤
产品名称:hsf细胞
中文名称:人皮肤成纤维细胞;hsf
规格:t25
形态特征:
生长状态:成纤维细胞样
特征特性:贴壁生长
培养条件:dmem(高糖)+15%fbs 澳洲胎牛(推荐hakata优等胎牛血清货号:hn-fbs-500)
传代方法:1:2传代
冻存条件:hakata ® 无血清细胞冻存液 货号:h-w-100 规格:100ml
支原体检测:阴性
使用权限:a类
参考文献:
供应商:上海慧颖生物科技有限公司
复苏周期:10个工作日左右
培养步骤:
1)复苏细胞:将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6ml完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%trypsin-0.53mm edta)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出,在1000rpm条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2ml培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
ps:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至t25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右完全培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。
2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000rpm条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000rpm条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入血清及dmso,冻存比例为90%fbs+10%dmso。
ps:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至t25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右完全培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。
慧颖生物是一家专业从事细胞培养相关产品的公司,拥有独立细胞房(可随时约定参观),供应胎牛血清,无血清细胞冻存液,无血清培养基,常规培养基,胰酶,双抗,完全培养基,str鉴定细胞,感受态细胞等,专业,专注,性价比高,是您shou选之家。
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